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    qEV高純度外泌體尺寸排阻SEC分離柱

     


            qEV尺寸排阻分離柱是由新西蘭IZON公司研發和生產的一種基于尺寸排阻法SEC原理的外泌體分離-純化技術。該技術使用快速、簡便,只需要15min就可以提取到完整的外泌體樣本,并且相較于其他方法,所提取的外泌體濃度更高,還可以重復使用。

    qEV產品優勢

              
     ●   高純度:去除99%以上的可溶性蛋白質,去除95%以上高密度脂蛋白
      無損傷:保持細胞外囊泡的完整性和生物功能

      標準化:每根分離柱均經過標準化、質量保證,并通過ISO13485標準認證

      可靠性:只要15min就可以得到完整外泌體樣本,已經在大規模的實驗室試驗得到證實

      適用性:適用于多種類型樣品的外泌體提取,包括:血清、血漿、尿液、細胞上清、腦脊液、唾液
                        等;尤其適用于外泌體功能研究中,用于細胞培養或動物注射的高

             
               純度外泌體的獲得


    qEV工作原理

        
            qEV是基于分子排阻法SEC原理,按照分子粒徑進行分段分離的方法。基本原理如圖1所示,將生物樣品流經具有固定孔隙的SEC填充物,吸附粒徑較小的分子如蛋白、脂類等,而較大粒徑的分子或顆粒不能進入孔隙。在緩沖液的作用下,較大粒徑的囊泡(外泌體)流速快,在特定的階段會被洗脫出來進入樣品收集管,成為實驗樣品,而小分子物質則需要更長的洗脫時間。

        

     

     

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      圖1 尺寸排阻SEC原理圖



    qEV使用步驟(以qEVoriginal產品為例)


           1、用洗脫緩沖液沖洗柱子。

           2、裝入500μL樣品。

           3、最開始的3ml是空隙體積,繼續向分離柱中添加PBS以洗脫囊泡(外泌體)。

           4、收集空隙體積后的1.5mL液體為高純度外泌體。

    收集結果展示

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    圖2 qEV收集結果展示

           
             如圖2,血清樣品中收集的組分,用qNano其進行定量測量。在280納米處用吸光度法測定蛋白質的相對濃度。數據表明,收集的第7至9組分具有最高濃度的囊泡(外泌體),而污染的血清蛋白洗脫的分數為第11至30組分(左圖)。通過比較分離前和分離后的囊泡(外泌體)與蛋白質濃度比,第7組分的囊泡富集量為蛋白質的6000倍(右圖)。根據樣品的不同,如果下游分析分別需要更高的囊泡(外泌體)純度或更高的囊泡(外泌體)產量,可將第7至9部分或第7至11部分匯集在一起


    產品規格選擇

     

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    SEC技術與超速離心技術的對比


    案例1   尺寸排阻SEC比超離UC獲取外泌體的
    純度更高


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    文獻解析

            該文獻通過對滑膜液經過相同的預處理后,分別使用超離、密度梯度離心和尺寸排阻進行外泌體的分離。并通過WB、TEM對其進行鑒定分析。



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            上圖中紅框所示的ApoA-1是HDL的標志物,可以發現UC和DGC都無法有效去除HDL,而SEC的WB圖中,外泌體標志物的出現和HDL標志物和血清白蛋白的出現幾乎不存在時間上的重疊,所以SEC可以收集到比較純凈的外泌體。



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                                   超離                                     密度梯度離心                                   尺寸排阻
           電鏡圖(如圖),超離電鏡下的圖像,不僅背景雜質多,而且發生了聚集現象,這種聚集會對下游分析產生較大不利影響。相比之下,SEC的背景純凈,外泌體特征明顯。


    案例2   尺寸排阻SEC比超離UC獲取外泌體
    生物活性更強


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    文獻解析

    該實驗研究了使用超離UC和尺寸排阻SEC分離的心肌祖細胞(HMECs)培養液的外泌體的功能可能的差異。通過外泌體刺激細胞,誘導EKR磷酸化,然后通過比較外泌體刺激后的pEKR和EKR的比率,來評價不同分離方法制備外泌體的功能活性。

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             WB顯示,在相同條件下,無論總蛋白量變化還是粒子數變化,用SEC的方法比超離他的pERK / ERK比率更高,表明SEC收集到的外泌體具有更高的生物活性。

    案例3  尺寸排阻SEC比超離UC獲得外泌體得率更大

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    文獻解析

    該文獻系統地比較了使用超離UC和尺寸排阻SEC兩種分離方法對大鼠血漿中外泌體分離的差異。結論表明,尺寸排阻SEC從血漿中分離的外泌體得率比超離UC得率高。

     

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           分別對不同的組分進行收集,比較了純度較高的5.0-6.5組分的外泌體蛋白,發現SEC的含量會比UC更高。

    對比結論

          
      
        上述幾篇文獻將尺寸排阻SEC與超離UC、密度梯度離心DGC在收集到外泌體的純度、生物活性和得率方面作比較,通過實驗數據、電鏡圖、WB圖像,發現SEC相較于其他兩種分離方法,獲取的外泌體純度更高、生物活性更強、得率更大

    相關文獻


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